Hieff TransTM脂質體轉染試劑,讓您對轉染自信滿滿

來源: 上海翊圣生物科技有限公司   2020-4-3   訪問量:1767評論(0)

Hieff TransTM脂質體轉染試劑,讓您對轉染自信滿滿

——效率高不高,一轉便知道

關鍵詞:liposomal ; transfection ; lipo2000 ; lipo3000

>>>背景介紹

轉染能夠讓我們更好的研究目的基因是如何在細胞中進行表達和調控。目前常見的轉染方法有:磷酸鈣共沉淀法、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和ploybrene、機械法(如顯微注射和基因槍法)、陽離子脂質體試劑,其中陽離子脂質體試劑轉染是目前最常用的轉染方法。

1:不同轉染方法轉染示意圖(圖來源于每日生物評論)

不同轉染方法的優對比

轉染方法

優勢

劣勢

磷酸鈣共沉淀法

價格低廉,操作較為簡單

轉染效率不穩定,發生DNA聚集等影響轉染的效率,高胞毒性,轉染效率較差

電穿孔法

效率高,適用于所有類型的細胞

電穿孔儀價格相對昂貴,細胞致死率高,核酸和細胞用量大

DEAE-葡聚糖

貼壁細胞轉染比較有效,也可用于某些懸浮細胞,操作簡單、結果可重復

對細胞有偏好性,對細胞有一定的毒副作用,且轉染時需要血清制細胞生長

ploybrene聚凝胺

操作相對簡單、價格一般

效率低、應用性有一定的局限

陽離子脂質體試劑

操作簡單、效率高、適用性廣、重復性好、毒性低

價格略高于其他化學試劑

病毒侵染法

效率高、對難轉染細胞、原代細胞的轉染效果很好

病毒包裝流程復雜、病毒有一定危險性

聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)

價格低、操作簡單,適用范圍

效率低于脂質體類轉染試劑、一些細胞接觸后產生敏感反應

Hieff TransTM脂質體核酸轉染試劑作為一款陽離子脂質體轉染試劑,與應用最為廣泛的Lipo2000相比,具有更高的轉化效率和更加便捷的操作。目前已經在多種細胞系中得以驗證,具體可參見下文中驗證過的細胞系匯總。

>>>作用原理

陽離子能夠通過表面所帶正電荷的靜電作用將核酸包裹,形成核酸-脂質體復合體。細胞膜表面帶負電荷,能夠將該復合體吸附,被吸附后的復合體能夠通過膜的融合作用或者細胞內吞的方式形成包涵體進入細胞。有小部分的DNA 能夠從包涵體中被釋放,并進入細胞質中,再進一步進入細胞核內轉錄、表達。

 

2:脂質體介導的轉染和內吞過程

>>>Hieff TransTM轉染試劑產品特點

高效性: 可對大多數真核細胞進行轉染,并且對于常見細胞系轉染效率達90%以上;

低毒性:轉染細胞形態良好并表達大量的轉染基因蛋白;

操作簡便:可以直接將脂質體復合物加入到含血清的培養基中;

多樣性:適合瞬時轉染和穩定轉染試驗。

>>>操作流程

3:細胞轉染實驗流程

>>>產品數據

4:轉染試劑雙質粒驗證結果

驗證過的細胞系匯總

293T

293FT

HEK293

HEK 293T

Caco2

COS-7

DF-1

Lenti X-293T

HeLa

HepG2

LM3

MCF-7

MDA-MB-231

MEF

NCI-H1975

NIH-3T3

PC12

Raw264.7

Vero

H9c2

Hepa1-6

MCF10A

CHO

5-8F

BV-2

A549

3t3

H520

HUVEC

C6

HaCaT

N2A

SGC-7901

H9

MKN-28

Hep 3B

SMCC7721

RKO

C2C12

More

>>>客戶反饋結果展示

Hieff TransTM Liposomal 轉染應用

細菌蛋白激活細胞自噬體形成

細胞:Hela 轉染質粒:細菌效應蛋白A LC3II:自噬體標記蛋白

細胞分裂紡錘體結構

細胞Hela 轉染質粒:Flag-tubulin 細胞核染色:Hoechst33342

 

 

DNA轉染

 

DNA轉染

 

Hieff TransTM

Lipo3000

 

Hieff TransTM

Lipo2000

圖片來源:復旦大學 細胞系:Hek293 核酸類型:DNA

 

圖片來源:長春應化所 細胞系:Hela 核酸類型:DNA

 

客戶提供部分細胞系轉染數據(僅供參考

細胞

培養板

細胞密度

DNA

Hieff TransTM

效率

293T

6

80%

g

L

90%

293FT

24

85%

g

L

90%

Hela

12

90%

0.2μg

0.6μL

90%

Raw264.7

35mm

80%

g

L

90%

Hek293

6

95%

g

10μL

80-90%

NCI-H1975

6

80%

g

10μL

80%

3t3

12

90%

1μg

L

50%

>>>價格比較

 

5:單次轉染反應各公司價格對比

 

>>>FAQ

Q1:配制核酸轉染試劑復合物時能否有血清的存在?

答:血清的存在會影響脂質體的形成,建議配制核酸轉染試劑復合物時采用無血清培養基(一般推薦MEM培養基)。

Q2:轉染實驗過程中是否需要更換成無血清培養基?

答:不需要,我們的轉染試劑可以在含血清的介質中進行轉染的過程。

Q3:轉染后需要進行終止嗎?

答:不需要。脂質體復合物可以穩定存在6個小時。如果在進行轉染前沒有進行細胞換液,為了保證細胞正常生長所需的營養,需要在46小時后換用新的培養基。但如果轉染之前已進行過換液則在脂質體轉染后不需要進行再次換液。

Q4:轉染試劑的保存及使用過程中的注意事項?

答:本試劑一定要4℃保存,要注意避免反復多次長時間開蓋,長時間開蓋會導致脂質體氧化而影響轉染效率。

Q5:若想提高轉染效率,應該注意什么?

答:a:轉染時細胞的密度,90%-95%。

b:轉染時,核酸和脂質體稀釋液要用MEM無血清培養基。

c:轉染后4-6h可選擇換液。

>>>使用客戶已發表文章

[1]. Hao, H., et al., Loss of Endothelial CXCR7 Impairs Vascular Homeostasis and Cardiac Remodeling After Myocardial Infarction: Implications for Cardiovascular Drug Discovery. Circulation, 2017. 135(13): p. 1253-1264.IF 18.881

[2] Zhang K, Zhao X, et al. Enhanced Therapeutic Effects of Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes with an Injectable Hydrogel for Hindlimb Ischemia Treatment. ACS Appl Mater Interfaces. 2018 Sep 12;10(36):30081-30091.IF 8.09

[3] Yang R, Yang E, et al. IL-12+IL-18 cosignaling in human macrophages and lung epithelial cells activates cathelicidin and autophagy, inhibiting intracellular mycobacterial growth. J Immunol. 2018 Apr 1;200(7):2405-2417.IF 4.539

[4] Cheng H, Fan X, et al. Cyclodextrin-Based Star-Like Amphiphilic Cationic Polymer as a Potential Pharmaceutical Carrier in Macrophages. Macromol Rapid Commun. 2018 May 28:e1800207. IF 4.441

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產品名稱

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Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑

40802ES02

0.5 mL

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